ПЦР или, иначе, полимеразная цепная реакция – это современный высокоинформативный метод молекулярно-генетической диагностики, активно применяемый для выявления у человека различных инфекционных и наследственных заболеваний.
Диагностика инфекций методом ПЦР: что это такое?
Положительный анализ ПЦР – что это значит? это свидетельствует об инфицировании коронавирусом SARS-CoV-2. Как и ПЦР тест, отрицательный результат теста на антигены коронавирусы свидетельствует об отсутствии инфекции лишь на момент проведения. Суть полимеразной реакции.
Риск получения ошибочного результата
- Другие статьи по теме
- Что такое анализ ПЦР?
- Преимущества ПЦР-диагностики
- Что такое ПЦР? О методе полимеразной цепной реакции
- Чем отличается ПЦР-тест на COVID и анализ на антитела - медицинский центр Бэби Плюс в Одинцово
Как определить коронавирус или что такое анализ ПЦР?
| Анализ ПЦР | Аббревиатура ПЦР расшифровывается как полимеразная цепная реакция. |
| ПЦР положительный – что это значит? | Если человек сдал тест на коронавирус, а результат оказался положительным, то это означает, что он является носителем вируса, в данный момент болеет COVID-19 или уже вылечился, но в его организме сохранились антитела. |
Чем ПЦР отличается от антител и какой анализ россиянам нужно сдавать при подозрении на ковид?
Специфичность и применение Анализ методом полимеразной цепной реакции стал «золотым стандартом» для выявления ряда инфекций. Сегодня можно говорить о том, что такое исследование проверено временем, а строгие клинические испытания только подтвердили его эффективность и точность. Метод ПЦР позволяет определить наличие возбудителя заболевания, даже если в образце присутствует всего несколько молекул ДНК. ПЦР диагностирует наличие патогенов, которые растут в течение длительного времени, не прибегая к трудоемким процедурам, что особенно важно в гинекологии и урологии при выявлении различных урогенитальных инфекций, передающихся половым путем. Такой анализ позволяет обнаружить даже одну бактериальную или вирусную клетку, что зачастую невозможно при использовании других иммунологических, бактериологических или микроскопических методик. Метод эффективен даже для форм микроорганизмов, которые трудно диагностировать или невозможно культивировать в лабораториях. Именно поэтому процедуру часто применяют для обнаружения скрытых и хронических инфекций.
В основе специфичности такого анализа — образование комплементарных комплексов между матрицей и праймерами — небольшими синтетическими нуклеотидами. В результате этого каждая из таких частей комплементарна с одной из цепей двуцепочечной матрицы, то есть позволяет выявить начало и конец участка. Метод обладает высокой антигенной изменчивостью, поэтому очень эффективен для выявления внутриклеточных микроорганизмов. С помощью метода ПЦР можно обнаружить патогены не только в полученном клиническом материале от пациента, но даже в мазке с поверхностей и т. Поэтому методика имеет широкую сферу применения. Очень часто ПЦР-анализ проводится для диагностики урологических и гинекологических заболеваний.
Например, для выявления хламидиоза, уреаплазмоза, гонореи, герпеса, гарднереллеза, ВПЧ вируса папилломы человека. Другая область применения — для дифференциальной диагностики в пульмонологии. В том числе, с помощью процедуры выявляется вирусная и бактериальная пневмония, туберкулез. В гастроэнтерологии анализ служит для выявления геликобактериоза.
Для того, чтобы понять, что означают те или иные результаты, необходимо рассмотреть каждый случай по отдельности: ПЦР — отрицательный, IgG — положительный, IgM — отрицательный. На данный момент, вирус в Вашем организме не выявлен. Вы были инфицированы коронавирусом ранее, но уже перенесли заболевание и теперь у Вас есть иммунитет к инфекции. Вы находитесь на поздней стадии заболевания или выздоровления. Скорее всего, Вы больше не являетесь разносчиком инфекции, но рекомендуется повторить ПЦР-тест через 3 дня. У Вас активная стадия заболевания, и Вы все еще представляете опасность для окружающих. В организме идет активная выработка иммунных белков — антител.
Количественные результаты оцениваются непосредственно врачом, поскольку этот показатель индивидуален. Ещё одно достоинство метода — он обнаруживает даже мизерное количество вирусов и бактерий и, соответственно, распознаёт болезнь, когда видимых клинических проявлений ещё нет. Благодаря этому лечение начинается на первичной стадии, задолго до того как появляются разного рода осложнения. ПЦР более объективен, чем многие другие иммунологические способы диагностики, поскольку практически не даёт ложно-положительных ложно-отрицательные значительно более редки ввиду высокой чувствительности метода.
Хочешь получать главные новости на свой телефон? Подпишись на наш Telegram-канал! Ваша реакция?
ПЦР: метод, который слишком хорош
| «Вероятность обнаружить вирус снижается». Когда нужно сдавать ПЦР-тест | Полимеразная цепная реакция: описание метода диагностики, показания, преимущества, подготовка, сроки, стоимость. Пройдите ПЦР в клинике ПрофМедЛаб. |
| Анализ ПЦР 12: что это такое, расшифровка, какие инфекции входят, цена, как сдать - | ПЦР положительный анализ означает инфицирование организма определенным микроорганизмом. |
Что такое анализ крови на ПЦР, и зачем он нужен
| ПЦР-тест и тест на антитела к коронавирусу: как разобраться в результатах? | Полимеразная цепная реакция почти для каждого из нас стала обыденностью, даже если этот каждый никогда и слов таких не слышал. |
| Положительный анализ на инфекцию: ПЦР или ИФА | Полимеразная цепная реакция (ПЦР, PCR) — это точный метод лабораторной диагностики, который используют для выявления возбудителей инфекционных заболеваний. |
| Что такое ПЦР: достоверность и точность | Положительный анализ ПЦР – что это значит? |
| Чем ПЦР отличается от антител и какой анализ россиянам нужно сдавать при подозрении на ковид? | Полимеразная цепная реакция почти для каждого из нас стала обыденностью, даже если этот каждый никогда и слов таких не слышал. |
Ложноположительный ПЦР: Почему так бывает?
ПЦР (полимеразная цепная реакция) – достижение молекулярной биологии, одна из главных методик клинической лабораторной диагностики конца 20-го и начала 21-го веков, приносящая огромную пользу в различных областях медицинской науки. Тут, помимо положительного и отрицательного результата, есть еще и сомнительный — это когда человек только заболевает и белок еще не выработался в нужных для определения объемах. ПЦР, бактериологические посевы. Что такое ПЦР, как работает метод ПЦР в диагностике, преимущества методики, показания, подготовка к проведению ПЦР-анализа, как проводится ПЦР-анализ, что показывают результата теста.
ПЦР диагностика - анализ на инфекции (+ видео)
Врач-инфекционист Андрей Поздняков говорит, что при положительном тесте, который приходит на протяжении долгого времени, есть вероятность, что это РНК уже инактивированного вируса, но ПЦР-методика не может дифференцировать РНК «неживого» вируса от РНК жизнеспособного. Поэтому определить, заразен ли человек при получении положительного результата ПЦР, не представляется возможным. Поэтому единственной гарантией от дальнейшего распространения вируса в данном случае может служить продолжение изоляции. Это могут быть остатки разрушенного вируса. Именно они могут давать такой результат, но пока нужно всё равно сдавать тесты. Владимир Болибок полагает, что само ощущение выздоровления у человека может быть ложным — пациент может чувствовать себя хорошо относительно того состояния, которое было при госпитализации или начале болезни. После затяжного течения вирусной инфекции было бы целесообразно обратиться за консультацией к иммунологу.
Она присутствует внутри клетки, но не упаковывается в вирионы, следовательно, ее наличие говорит о том, что вирус поражает клетки больного, то есть о рецидиве или повторном заражении. Авторы отмечают, что этот пациент был пожилым, имел хронические заболевания и симптомы инфекции на момент тестирования на 16-й день после выздоровления. Также на репликативную РНК были проверены и предыдущие образцы от 32 пациентов с обнаруженной общей РНК , полученные на момент постановки диагноза и хранившиеся в замороженном виде.
Выяснилось, что во время первого тестирования все испытуемые имели репликативную РНК коронавируса. Это дает основания предполагать, что большинство таких носителей уже не заразны для окружающих.
В совокупности, результаты этих тестов дадут самый четкий и информативный результат. Для того, чтобы понять, что означают те или иные результаты, необходимо рассмотреть каждый случай по отдельности: ПЦР — отрицательный, IgG — положительный, IgM — отрицательный. На данный момент, вирус в Вашем организме не выявлен. Вы были инфицированы коронавирусом ранее, но уже перенесли заболевание и теперь у Вас есть иммунитет к инфекции.
Вы находитесь на поздней стадии заболевания или выздоровления. Скорее всего, Вы больше не являетесь разносчиком инфекции, но рекомендуется повторить ПЦР-тест через 3 дня. У Вас активная стадия заболевания, и Вы все еще представляете опасность для окружающих.
Но теоретически такой же фрагмент может присутствовать и у других микроорганизмов, геном которых на сегодняшний день еще не расшифрован. Их присутствие в пробе может привести к ложноположительному результату анализа. Изменчивость микроорганизмов. Эта способность возбудителей к мутации иногда приводит к тому, что некоторые их штаммы становятся неуловимыми в процессе ПЦР-анализа. Чтобы уменьшить риски, разработаны стандарты объемов испытаний тест-систем ПЦР-диагностики, включающие проверку на перекрестные реакции и тестирование всех известных штаммов конкретного возбудителя.
Забор биоматериала. Процедура, предшествующая непосредственному анализу, которая осуществляется в процедурном кабинете соответствующего профиля. Забор делается с помощью стерильного оборудования только в стерильные пробирки. Материалом для исследования могут быть: Эпителиальные соскобы со слизистых оболочек: из уретры, из цервикального канала, со слизистой дыхательных путей и зева, из конъюнктивы. Забор проводится с помощью специального ершика, при этом недопустимо попадание в материал следов крови. Собираются первые 50 г утренней мочи в стерильную емкость. Материал используется для диагностики мочеполовых инфекций. Используется для ПЦР-диагностики туберкулеза и респираторных форм микоплазмоза и хламидиоза.
Мокроту собирают в стерильный флакон в количестве 15—20 мг. Кровь, сыворотка, плазма. С их помощью диагностируются гепатиты, герпес, ВИЧ-инфекция. Для анализа используется венозная кровь 1—1,5 мл , собранная у пациента натощак в стерильную пробирку. Замораживать кровь категорически запрещается. Биологические жидкости. К ним относятся слюна, сок простаты, околоплодная, плевральная, спинномозговая, суставная жидкости. Собираются при помощи пункции с использованием стерильного инструментария в количестве 0,1—1,5 мл в стерильные пробирки.
Биоптаты, то есть материалы, полученные путем биопсии. Обычно на анализ отправляют биоптаты двенадцатиперстной кишки или желудка, чтобы выявить хеликобактерную инфекцию. Объем материала 2—3 мм3. Хранение и транспортировка биоматериала. Хранить образцы можно при комнатной температуре не более 2 часов. Оттаивание и повторное замораживание проб запрещено.
Диагностика COVID-19: обзор основных методов
диагностика гепатитов. Положительный результат ПЦР указывает на выявление следов инфекции в исследуемой биологической пробе. С большой точностью положительный результат указывает на наличие инфекции в данный момент времени. Анализ — полимеразная цепная реакция имеет аббревиатуру — ПЦР. Тут, помимо положительного и отрицательного результата, есть еще и сомнительный — это когда человек только заболевает и белок еще не выработался в нужных для определения объемах. ПЦР или полимеразная цепная реакция является золотым стандартом в диагностике многих инфекций.
Лабораторная диагностика коронавирусной инфекции
- Выберите любимую аптеку
- Результаты ПЦР диагностики
- Результаты ПЦР диагностики
- Ученый раскрыл правду о тестах на коронавирус: почему бывают ошибки
- ПЦР-тестирование: как работает метод ПЦР в диагностике
Что делать при положительном тесте на коронавирус
В связи с этим, многие люди начали сталкиваться с такой проблемой, как интерпретация результатов теста. Как же все-таки интерпретировать результаты? АльфаМед расскажет Вам, что означают те или иные показатели и поможет разобраться! ПЦР-тест необходимо сдавать для установления факта заболевания коронавирусом.
Этот вариант диагностики позволяет обнаружить вирус на его начальной стадии, даже если у пациента еще нет признаков и симптомов болезни. Антитела, в свою очередь, это ответная реакция организма на коронавирус. Результат теста на антитела IgG и IgM позволяет понять, на какой именно фазе заболевания находится пациент, а также помогает определить, была ли перенесена инфекция в прошлом.
Станкевич Л. Лабораторией госпиталя Hadassah Medical руководит Любовь Ивановна Станкевич, кандидат медицинских наук, специалист в лабораторной диагностике с более, чем 25-летним опытом работы в России и за рубежом, из них почти 20 лет на руководящих должностях. В условиях пандемии COVID-19 она занимается созданием системы тестирования на коронавирус SARS-Cov-2 — диагностики заболевания, с применением не просто разных, а наилучших, наиболее информативных лабораторных диагностических методов, отвечающих цели исследования. Обнаружение вируса Первый и наиболее проверенный и широко используемый метод — ПЦР-диагностика. Используя молекулы мишеней, мы ищем в исследуемом образце специфические участки вирусного генома — последовательности нуклеотидов, характерные только для вируса SARS-Cov-2. И если такие находятся, запускаем цепную реакцию, многократно воссоздавая этот фрагмент. В итоге из единичного найденного участка генома вируса создаётся в тысячи раз усиленная его концентрация.
Со специфическим фрагментом генома вируса с продуктами реакции , связывается флюоресцентная метка — своеобразный маркер, который мы можем определить и измерить, поймав оптико-флюоресцентный сигнал. Существуют различные модификации этого метода, но цель их одна — поиск специфических участков генома вируса, присутствие которых позволяет сделать вывод, что в данном биоматериале вирус есть. Все — и азиатские врачи, и европейцы, и американцы, и мы в России и в Израиле — все работают этим методом. Отрицательный и ложноотрицательный результат Однако, отрицательный результат ПЦР-анализа, к сожалению, не говорит об обратном, не исключает наличие вируса в организме. Мы можем только говорить, что вирус не обнаружен. Не обнаружен в исследуемом биоматериале, которым чаще всего является мазок из рото- или носоглотки.
Папилломатоз Провоцируется особым одноименным вирусом.
Вызывает образование на коже и внутренних органах хорошо знакомых многим наростов. В самом простом случае, речь идет о бородавках. Но существуют и другие аномальные структуры. Например, невус родинка , остроконечная кондилома. Последние образуются на репродуктивных органах и в области заднего прохода, передаются половым путем. Многие штаммы вируса папилломы человека а известно их более 150 потенциально онкогенны. Способны спровоцировать рак.
Потому ПЦР незаменима при ранней диагностике и разработке индивидуальных мер профилактики, лечения. Герпес Любого типа. Известно более 6-и штаммов этого вируса. Первый провоцирует образование папул в полости рта и на губах. Второй — транспортируется половым путем и плохо поддается коррекции. Третий — это вирус Варицелла-Зостер, которые вызывает ветряную оспу. Четвертый становится виновником мононуклеоза.
Пятый — цитомегалии. Шестой влияет на работу головного мозга. Так можно продолжать и далее. Суть в том, что с помощью ПЦР удается выявить сам герпес и его штамм, определить характер и давность поражения, патологического процесса. В этом суть диагностики. Гепатит Воспаление печени. Полимеразная цепная реакция назначается не только для определения самого факта расстройства.
Суть в другом. ПЦР диагностика инфекций дает возможность дифференцировать септические и токсические, прочие формы гепатита, определить конкретный штамм вируса, который спровоцировал патологический процесс. Кандидоз Молочница. Вызывается грибком с идентичным названием. Поражает слизистые оболочки. В том числе полость рта, половые органы женщины реже — мужчины. Вызывает массу осложнений и дискомфортных ощущений.
ПЦР тест назначается в качестве верифицируемого, подтверждающего догадки метода, исследуется параллельно с данными анамнеза, визуальной оценки, симптоматики. Хламидиоз, уреаплазмоз, микоплазмоз и прочие венерические инфекции. На ранних стадиях патологического процесса есть риск не заметить симптомы. Но именно этот момент — лучший для терапии. Поскольку дальше начинаются необратимые изменения в органах и системах. Болезнь не удается взять под контроль, обеспечить продолжительную жизнь пациенту также невозможно.
Итальянские исследователи проверили, является ли такой вирус жизнеспособным и передающимся. Авторы работы изучили мазки 176 выздоровевших пациентов, которые прекратили изоляцию, но еще находились в амбулаторном отделении больницы. Критериями выздоровления были отсутствие повышенной температуры в течение 3 дней подряд, снижение симптоматики и 2 отрицательных ОТ-ПЦР теста на РНК коронавируса с интервалом 24 часа. При этом только у одного из пациентов имелась и репликативная субгеномная РНК. Она присутствует внутри клетки, но не упаковывается в вирионы, следовательно, ее наличие говорит о том, что вирус поражает клетки больного, то есть о рецидиве или повторном заражении.
Какие ПЦР-анализы можно сдать бесплатно
- ПЦР-тесты: для чего нужен, как сдавать анализ, цена, можно ли верить результатам
- Анализ ПЦР
- Что представляет собой методика ПЦР и как она работает?
- ПЦР диагностика: что это такое
Что такое анализ крови на ПЦР, и зачем он нужен
В клетках, фермент ДНК-полимеразы отвечает за копирование и "ремонт" ДНК и способен удлинять короткие нуклеотидные цепочки праймеров, последовательно присоединяя к одному из концов праймера дополнительные нуклеотиды, таким образом, достраивая цепь до конца. Так ДНК копирует саму себя. Третий этап - достраивание цепей ДНК. Комплементарное достраивание цепей ДНК происходит от конца к концу цепи в противоположных направлениях, начиная с участков присоединения праймеров. Материалом для синтеза новых цепей ДНК служат добавляемые в раствор "кирпичики" - все те же производные аденина, гуанина, цитозина и тимина.
Процесс синтеза катализируется ферментом термостабильной ДНК-полимеразой Taq-полимеразой и проходит при температуре 70 - 72 градуса. Время протекания синтеза зависит от длины достраиваемого фрагмента и обычно принимается равным одной минуте на каждую тысячу пар оснований. Теперь мы имеем две двойные цепочки ДНК вместо одной, исходной. Ну а дальше процесс повторяется.
Опять температура повышается до 93 - 95 градусов, цепочки разъединяются... Обычно за 1 - 2 часа при наличии вирусной ДНК ее становится столько, что не заметить ее, даже при стандартном методе обнаружения становится просто нереально. Схематично, это выглядит так: Подведём итог: каждый цикл ПЦР состоит из трех стадий. В первую стадию денатурация происходит так называемое раскручивание ДНК — то есть разделение связанных между собой двух цепей ДНК.
Во вторую отжиг - происходит присоединение праймера к участку нити ДНК. И, наконец, в заключительной третьей стадии, "фермент-строитель" достраивает нити, восстанавливая ДНК. В настоящее время весь этот сложный процесс протекает в одной пробирке и состоит из повторяющихся циклов размножения амплификаций определяемой ДНК с целью получения большого количества копий, которые могут быть, затем выявлены обычными методами. То есть из одной нити ДНК мы получаем сотни тысяч или миллионы копий.
Поначалу для каждой стадии использовали отдельную водяную баню, что сильно увеличивало время получения результата. Поставить "на поток" метод помогли специальные автоматические термостаты - амплификаторы, в которых изменение температуры происходит по заданной программе. Современный амплификатор — сложный электронный прибор, не только управляющий циклами амплификации и поддерживающий необходимые температуры, но и делающий количественные замеры после каждого цикла. В её основе лежит принцип флуоресцентной детекции продуктов ПЦР непосредственно в ходе амплификации.
Детекция продуктов амплификации проводится прямо в реакционной среде через стенки или крышку закрытой пробирки. Для этого в состав реакционной смеси, наряду с праймерами и другими компонентами реакции, добавлены специальные флуоресцентные метки зонды. Флуоресцентный зонд выполнен по той же технологии, что и праймер и отличается он него тем, что на одном его конце прикреплена флуоресцентная молекула флуорофор , а на другом конце расположена специальная молекула-гаситель флуоресценции.
Авторы работы изучили мазки 176 выздоровевших пациентов, которые прекратили изоляцию, но еще находились в амбулаторном отделении больницы. Критериями выздоровления были отсутствие повышенной температуры в течение 3 дней подряд, снижение симптоматики и 2 отрицательных ОТ-ПЦР теста на РНК коронавируса с интервалом 24 часа. При этом только у одного из пациентов имелась и репликативная субгеномная РНК. Она присутствует внутри клетки, но не упаковывается в вирионы, следовательно, ее наличие говорит о том, что вирус поражает клетки больного, то есть о рецидиве или повторном заражении.
Авторы отмечают, что этот пациент был пожилым, имел хронические заболевания и симптомы инфекции на момент тестирования на 16-й день после выздоровления.
В это время человек все еще является разносчиком инфекции, даже если у него нет никаких симптомов; присутствие IgM в небольшом количестве в сочетании с IgG указывает на завершение болезни. Иммуноглобулин типа G производится в острой стадии и остается в крови после выздоровления, обеспечивая иммунитет длительное время. Если тест показал наличие антител к коронавирусу типа IgG, значит у вас уже есть иммунитет к данному заболеванию и вы не представляете опасности для окружающих. Небольшое количество иммуноглобулинов свидетельствует о том, что вы переболели недавно. Какой тест сдавать?
Оба варианта тестов являются эффективными, но в большинстве случаев мы рекомендуем делать тест на антитела, так как он более универсальный. Быстрее - Сейчас в лабораториях большие очереди по ПЦР-тестам и результатов можно ждать от 3 до 5 дней. По антитела результаты будут готово в течение 3-х дней. Доступность - ПЦР-тест стоит дороже, так как тест-системы более дорогие. ПЦР-тест необходим для того, чтобы выявить инфекцию на ранней стадии, до развития иммунного ответа. Его рекомендуют делать в тех случаях, когда тест на антитела дал отрицательный или неоднозначный результат.
Если вам трудно определиться с выбором и вы хотите получить полную картину, не теряя лишнее время, то сразу делайте 2 теста.
Такой метод диагностики показывает, когда пациенту необходима госпитализация. Если концентрация увеличена в 3-4 раза от нормы, это означает, что начались осложнения. При этом анализе учитывается возраст пациента, поскольку после 50 лет уровень D-димера повышается. Хронические заболевания и беременность также влияют на показатель. Специфическая Среди таких методов диагностики чаще всего используются два вида.
Экспресс-тесты Дают возможность узнать, выработался ли у человека иммунитет к вирусу. Для этого проводятся исследования на наличие двух антител: G и M. Если результат такого иммунохроматографического ИХГ теста положительный, это свидетельствует о том, что заболевание в организме протекает уже больше недели. ИХГ анализ помогает быстро выявить даже бессимптомный коронавирус. Кроме того, можно оценить уровень иммунной защиты организма. Отличие экспресс-тестов от обыкновенных не только в быстром результате, но и в месте проведения.
Делаются такие не в специальной лаборатории, а локально. Берется кровь из пальца либо из вены.
Что выбрать: ПЦР-тест или тест на антитела к COVID-19?
Поставить диагноз на основании полимеразной цепной реакции можно через 48 часов после сдачи биологического материала, что дает возможность своевременно начать лечение. Возможность количественного анализа. Эта характеристика важна при выявлении заболеваний, вызываемых условно патогенной микрофлорой например, кандидоза. К недостаткам ПЦР-диагностики можно отнести необходимость в высокотехнологичном оборудовании и высококвалифицированных специалистах. Кроме этого, из-за крайне высокой чувствительности есть риск неверного результата, если пациент инфицирован сразу несколькими видами микроорганизмов.
Специфичность и применение Анализ методом полимеразной цепной реакции стал «золотым стандартом» для выявления ряда инфекций. Сегодня можно говорить о том, что такое исследование проверено временем, а строгие клинические испытания только подтвердили его эффективность и точность. Метод ПЦР позволяет определить наличие возбудителя заболевания, даже если в образце присутствует всего несколько молекул ДНК. ПЦР диагностирует наличие патогенов, которые растут в течение длительного времени, не прибегая к трудоемким процедурам, что особенно важно в гинекологии и урологии при выявлении различных урогенитальных инфекций, передающихся половым путем.
Такой анализ позволяет обнаружить даже одну бактериальную или вирусную клетку, что зачастую невозможно при использовании других иммунологических, бактериологических или микроскопических методик. Метод эффективен даже для форм микроорганизмов, которые трудно диагностировать или невозможно культивировать в лабораториях. Именно поэтому процедуру часто применяют для обнаружения скрытых и хронических инфекций. В основе специфичности такого анализа — образование комплементарных комплексов между матрицей и праймерами — небольшими синтетическими нуклеотидами.
В результате этого каждая из таких частей комплементарна с одной из цепей двуцепочечной матрицы, то есть позволяет выявить начало и конец участка. Метод обладает высокой антигенной изменчивостью, поэтому очень эффективен для выявления внутриклеточных микроорганизмов. С помощью метода ПЦР можно обнаружить патогены не только в полученном клиническом материале от пациента, но даже в мазке с поверхностей и т. Поэтому методика имеет широкую сферу применения.
Вот работа из Южной Кореи. Среди 108 переболевших пациентов, у которых отрицательный тест вновь стал положительным, на специальной клеточной культуре живой вирус не был обнаружен ни у кого. Отследили 790 контактов с этими пациентами - также ни одного от них заразившегося", - пояснил доктор. Он пояснил, почему зачастую ПЦР тест "обманывает".
Одна из причин - небрежный забор биоматериала из носоглотки. Это приводит к тому, что тест становится неинформативным. А вот есть он или нет у человека - зависит от того, насколько технически правильно был взят мазок. Иными словами, если есть клиника вирусной пневмонии, но тест отрицательный, то всё равно лечим как COVID.
Или повторяем тест после забора материала во время бронхоскопии.
Основная причина — так называемая кросс-контаминация, перекрестное загрязнение одного образца содержимым другого. Это может произойти на любом этапе тестирования — взятии мазка, транспортировки или уже в лаборатории.
Тогда для загрязнения достаточно попадания капель или даже аэрозоля с этого образца, — говорит Наталья Гасилова. Есть также требование — оставлять зонд, которым берется биоматериал, в пробирке. Его полагается отламывать или отрезать ножницами.
При выполнении этой операции тоже есть риск испачкать перчатки, поэтому их надо каждый раз менять. По словам специалиста, загрязнение «чистого» образца может случиться и при транспортировке анализов. В итоге пробирка снаружи будет контаминирована и, если потом пробирки ставятся в один штатив и перчатки не меняются, частицы вируса могут «переноситься» в другой образец.
Эта стадия длится 7—10 минут. Количество специфического продукта реакции ограниченного праймерами теоретически возрастает пропорционально 2n — 2n, где n — число циклов реакции [15]. Число «длинных» копий ДНК тоже растёт, но линейно, поэтому в продуктах реакции доминирует специфический фрагмент. Рост требуемого продукта в геометрической прогрессии ограничен количеством реагентов, присутствием ингибиторов , образованием побочных продуктов. На последних циклах реакции рост замедляется, это называют «эффектом плато». Используют две пары праймеров и проводят две последовательные реакции. Вторая пара праймеров амплифицирует участок ДНК внутри продукта первой реакции. Инвертированная ПЦР [en] inverse PCR — используется в том случае, если известен лишь небольшой участок внутри нужной последовательности. Этот метод особенно полезен, когда нужно определить соседние последовательности после вставки ДНК в геном. Для осуществления инвертированной ПЦР проводят ряд разрезаний ДНК рестриктазами с последующим соединением фрагментов лигирование.
В результате известные фрагменты оказываются на обоих концах неизвестного участка, после чего можно проводить ПЦР как обычно. Этим методом часто определяют, где и когда экспрессируются данные гены. Используется в некоторых методиках секвенирования и гибридизационного анализа.