метод применяется в медицине, биологии, ветеринарии, криминалистике, санитарной службе и других отраслях деятельности человека. Положительный результат такого теста требует обязательной проверки методом ПЦР (полимеразной цепной реакции).
ПЦР-тест и тест на антитела к коронавирусу: как разобраться в результатах?
ПЦР (полимеразная цепная реакция) на гепатит С — определяет причину появления РНК вируса в организме человека. В свою очередь главврач клинико-диагностической лаборатории "Инвитро — Сибирь" Андрей Поздняков считает, что надолго сохраняющийся положительный ПЦР-тест может быть связан с особенностями дельта-варианта коронавируса. Положительный результат ПЦР-тестирования позволяет своевременно выявить заболевание, назначить нужное лечение и добиться изоляции пациента, что сохранит других людей от риска заражения. Что такое полимеразная цепная реакция (ПЦР)?
Суть метода ПЦР
- Что такое ПЦР ❓ Метод полимеразной цепной реакции диагностики половых инфекций
- ПЦР-тест (мазок) на коронавирус или сдать кровь на антитела - какой тест лучше? | VMedic
- ПЦР на гепатит C: расшифровка количественного и качественного анализа, норма
- ПЦР-тест (мазок) на коронавирус или сдать кровь на антитела - какой тест лучше? | VMedic
- О методе ПЦР
- В Минздраве объяснили, от чего зависит результат ПЦР-теста
В Минздраве объяснили, от чего зависит результат ПЦР-теста
Чувствительность диагностических инструментов для выявления мутаций онкогенов и генов подавления опухоли была улучшена по крайней мере в десять тысяч раз благодаря ПЦР, что позволяет раньше диагностировать, например, такие виды рака, как лейкемия. Метод ПЦР также позволил разработать индивидуальную терапию для больных раком. Кроме того, ПЦР может использоваться для типирования тканей, которое имеет жизненно важное значение для имплантации органов. Образцы берут либо с помощью амниоцентеза либо с помощью биопсии ворсин хориона. В отличие от многих других тестов, ПЦР тест способен обнаружить признаки заболевания на самых ранних стадиях инфицирования, так как для выделения искомого ДНК или РНК достаточно минимального количества генетического материала патогена в образце биоматериала. Другие виды исследования могут оказаться ложноотрицательными из-за того, что в образце недостаточно много вирусов или бактерий или организм не успел выработать достаточное количество антител. ПЦР-анализ проводится на образце одного из следующих видов биоматериала: кровь, слюна, слизь, ткань, гной, мокрота, моча. Этот процесс называется ПЦР с обратной транскрипцией. Обнаружение вирусной РНК с помощью ПЦР позволяет обеспечить диагностику COVID-19 на ранней стадии - до того, как организм выработает ответ в виде антител или даже до того, как у человека появятся симптомы заболевания. Тесты ПЦР играют решающую роль в предотвращении распространения заболеваний, так как часто позволяют выявить инфекции на ранней стадии, еще до появления симптомов. Количественный ПЦР-анализ позволяет оценить инфекционную нагрузку на организм, а также используется для анализа изменений экспрессии генов в опухолях.
Важна также и высокая скорость проведения исследования.
Но всё дело в том, что половинки не могут соединяться, как попало, а только особыми "комплементарными" парами. Комплементарность — это точное взаимное соответствие и взаимное дополнение. Если хотите - единство противоположностей!
Нуклеотиды обладают свойством комплементарности, то есть сцепляться друг с другом могут только нуклеотиды, входящие в одну комплементарную пару. Никакие другие связи в природе не возможны. Это весьма напоминает поведение магнитов, когда южный полюс легко сцепляется с северным, а попытки соединить юг с югом и север с севером обречены на провал… Здесь тоже самое, только полюсов не два, а четыре попробуйте это себе представить. Свойство комплементарности - ключевое в методе ПЦР.
Комплементарными являются пары Тимин - Аденин и Гуанин — Цитозин. Практически это означает, что напротив аденина A в одной цепочке ДНК, в другой цепочке обязательно стоит тимин T , а напротив гуанина G — цитозин C. Схематически всё это выглядит следующим образом: Кроме ДНК, точно такую же структуру имеет РНК рибонуклеиновая кислота , отличающаяся от ДНК тем, что вместо тимина в ней используется урацил и комплементарная пара имеет вид A — U. РНК — является хранителем генетической информации у некоторых вирусов, которые называются ретровирусами.
Наиболее известный и активно изучаемый представитель этого поганого семейства — ВИЧ. Не смотря на то, что размеры клетки исчисляются микронами, из-за очень специфической плотной упаковки спирали, ядро клетки свободно вмещает десятки хромосом. Итак, пора переходить к решению задачи. Рассматривая поставленную выше задачу, мы уже увидели две основных проблемы на пути к её решению.
Понятно, что с одной стороны, выискивать клетку возбудителя инфекции среди миллионов клеток крови — занятие достаточно бесперспективное, если не сказать бестолковое, а с другой стороны, выделять ДНК из клеток " в рукопашную" — тоже не вариант, из-за опасности порвать на кусочки, всё что мы с таким трудом отыскали… Поэтому, нам очень помог бы какой-нибудь метод, позволяющий активно размножать ДНК, но делающий это только с определёнными, "избранными" экземплярами. Это позволит увеличивать концентрацию интересующей культуры до уровней, безошибочно определяемых и не требующих длительного поиска. Вот этим чудо-методом и стал метод полимеразной цепной реакции ПЦР. Эта реакция носит название репликации ДНК.
Так это звучит сухим академическим языком. Но мы задались целью, объяснить Вам всё, буквально, "на пальцах", а потому продолжим свой рассказ о том, как всё происходит. На первом этапе реакции надо разъединить двойную нить ДНК. Этот процесс называется денатурацией и проходит при температуре 93 - 95 градусов Цельсия.
Уже через 30 - 40 секунд связи нуклеотидов разрываются и вместо двойной цепи получаются две одиночные.
Длительность их сохранения в организме на сегодняшний день точно неизвестна. Тестирование на антитела к вирусу SARS-Cov-2 рекомендуется использовать в следующих случаях: в качестве дополнительного метода диагностики острой инфекции не ранее 7-го дня болезни для IgM, не ранее 10-14-го дня болезни для IgG или при невозможности по какой-либо причине исследования мазков; для выявления лиц с бессимптомной формой инфекции; для установления факта перенесенной ранее инфекции при обследовании групп риска и проведении массового обследования населения для оценки уровня популяционного иммунитета; для отбора потенциальных доноров иммунокомпетентной антиковидной плазмы. Донорами антиковидной плазмы могут стать лица в возрасте от 18 до 55 лет, с отсутствием противопоказаний к донорству ряд хронических заболеваний, беременность , которые болели коронавирусной инфекцией и выздоровели, при условии, что с начала болезни прошло не менее 5 недель. Решение о том, может ли человек стать донором антиковидной плазмы, принимает врач. Отдельно стоит сказать об оценке степени иммунной защиты формировании иммунитета после вакцинации. На сегодняшний день известно, что после перенесенной коронавирусной инфекции в организме могут формироваться антитела IgG к нескольким белкам коронавируса.
Исследуемые после болезни IgG — это антитела к так называемому N-белку коронавируса исследуется в большинстве лабораторий. До 6 рабочих дней Доступно с выездом на дом 1 090 руб В корзину Этот анализ выявляет наличие или отсутствие антител. При повторном выполнении количественного анализа можно оценивать устойчивость иммунного ответа по динамике уровня этих антител. Тест на антитела к N-белку не информативен для оценки поствакцинального иммунитета.
Севиля Ибраимова 13 ноября 2019 Перечень анализов, проводимых при помощи ПЦР-диагностики расширяется с каждым днём. ПЦР или, иначе, полимеразная цепная реакция — это современный высокоинформативный метод молекулярно-генетической диагностики, активно применяемый для выявления у человека различных инфекционных и наследственных заболеваний. Официальной датой изобретения этого метода диагностики считают 1983 год, а «родителем» - американского биохимика Кэри Муллиса. Он хотел создать метод, благодаря которому можно было бы амплифицировать ДНК увеличивать число её копий в ходе многократных последовательных удвоений исходной молекулы ДНК с помощью фермента ДНК-полимеразы. Это событие стало поистине революционным и оказало в последующем серьёзное влияние на развитие молекулярной биологии, генетики и медицины.
Что такое ПЦР: достоверность и точность
это свидетельствует об инфицировании коронавирусом SARS-CoV-2. Как и ПЦР тест, отрицательный результат теста на антигены коронавирусы свидетельствует об отсутствии инфекции лишь на момент проведения. Если у человека положительный ПЦР-тест, первое, что он должен сделать — это позвонить в свое лечебное учреждение. Положительный ПЦР означает только то, что Вы заразны для окружающих и выделяете вирус.
ПЦР-тестирование: как работает метод ПЦР в диагностике
Он поясняет, что вирус в носоглотке зараженного появляется примерно за неделю до появления симптомов и продолжает выделяться в среднем еще две недели после их начала. Обзор 28 исследований показывает, что ПЦР-тест остаётся положительным в среднем 18 дней. При этом они никак не являются источниками инфекции. Берут с большим запасом: не менее 10 дней от начала симптомов, плюс 3 дня после их исчезновения", - добавляет Мясников. Он также пояснил, что при анализе на антитела определяют не сам вирус, а его "следы". Антитела к коронавирусу появляются в среднем через 8-12 дней от начала симптомов. Первые IgM выявляются раньше, и через 4-6 дней после их появления начинают снижаться и исчезают.
Поэтому их наличие говорит о том, что вы переносите острую фазу болезни. Напомню: сразу после наступления симптомов IgM не определяются, они появятся в середине болезни и будут сопровождать ее до выздоровления.
Доктора рекомендуют перепроверять результаты домашних экспресс-тестов в лабораториях Источник: Александр Ощепков При ситуации, когда положительный результат в течение месяца подтверждается лабораторией, важно понять, есть ли у человека какие-то жалобы и симптомы болезни, добавляет врач. Если симптомы отсутствуют и самочувствие человека не страдает, то, вероятнее всего, этот человек — носитель коронавируса. Ему необходимо минимизировать контакты, носить маску и получить консультацию инфекциониста, — считает Олеся Миропольская. По ее словам, это зависит от иммунной системы организма и «дозы» вируса, полученной человеком: — Положительный ПЦР часто бывает в течение трех недель, но может держаться и месяц. Иногда у пациента уже прошли клинические симптомы, например, вылечили пневмонию, но вирус остается. Этот человек является вирусовыделителем. Иногда мы таких пациентов выписываем, но предупреждаем, что нужно изолироваться. Андрей Поздняков, врач-инфекционист, главный врач клинико-диагностической лаборатории ООО «Инвитро — Сибирь», напротив, замечает, что сейчас превалирующим штаммом является «дельта», кардинальное отличие которого заключается в том, что он активно размножается в организме: — Отсюда его способность «пробивать» иммунную защиту.
Более активное размножение в сравнении ведет к тому, что вирусных частиц на оболочках слизистых становится на несколько порядков больше. Соответственно, они более длительное время могут улавливаться методиками обнаружения, в том числе ПЦР. То есть время выделения вируса просто стало больше. Андрей Поздняков подтверждает, что при положительном тесте, который приходит на протяжении долгого времени, есть вероятность, что это РНК уже инактивированного вируса, но ПЦР-методика не может дифференцировать РНК «неживого» вируса от РНК жизнеспособного. Поэтому определить, заразен ли человек при получении положительного результата ПЦР, не представляется возможным. Терапевт Ирина Непомнящих объясняет, что в такой ситуации нужно изолироваться и ждать отрицательного результата: — Сейчас часто бывает, что ПЦР долгое время остается положительным.
В России продолжается масштабная кампания по вакцинации. Граждане могут привиться бесплатно. Вся актуальная информация по ситуации с коронавирусом доступна на сайтах стопкоронавирус. Телефон горячей линии по вопросам коронавируса: 8 800 2000-112.
Оба варианта тестов являются эффективными, но в большинстве случаев мы рекомендуем делать тест на антитела, так как он более универсальный. Быстрее - Сейчас в лабораториях большие очереди по ПЦР-тестам и результатов можно ждать от 3 до 5 дней. По антитела результаты будут готово в течение 3-х дней. Доступность - ПЦР-тест стоит дороже, так как тест-системы более дорогие. ПЦР-тест необходим для того, чтобы выявить инфекцию на ранней стадии, до развития иммунного ответа. Его рекомендуют делать в тех случаях, когда тест на антитела дал отрицательный или неоднозначный результат. Если вам трудно определиться с выбором и вы хотите получить полную картину, не теряя лишнее время, то сразу делайте 2 теста. Это самый лучший вариант. Зачем проводить тест на коронавирус Коронавирус COVID-19 часто протекает незаметно, человек может не испытывать никаких симптомов, но при этом заражать окружающих. Неизвестно, как отреагирует организм другого зараженного, а ведь в некоторых случаях все заканчивается аппаратом искусственной вентиляции легких. Если вы будете проходить периодическое тестирование, то сможете своевременно обнаружить инфекцию и принять меры по самоизоляции, чтобы не заразить близких. Те же, кто переболел, могут быть более спокойными, так как ученые склоняются к мнению, что антитела дают защиту от повторного заражения.
Что еще почитать
- Что такое ПЦР-тест и для чего его сдают
- О методе ПЦР
- Чем отличается ПЦР-тест на COVID и анализ на антитела - медицинский центр Бэби Плюс в Одинцово
- Как делается тест?
- Анализ методом ПЦР. Что такое ПЦР-диагностика и для чего она используется
Что такое анализ крови на ПЦР, и зачем он нужен
Ну а дальше процесс повторяется. Опять температура повышается до 93 - 95 градусов, цепочки разъединяются... Обычно за 1 - 2 часа при наличии вирусной ДНК ее становится столько, что не заметить ее, даже при стандартном методе обнаружения становится просто нереально. Схематично, это выглядит так: Подведём итог: каждый цикл ПЦР состоит из трех стадий. В первую стадию денатурация происходит так называемое раскручивание ДНК — то есть разделение связанных между собой двух цепей ДНК.
Во вторую отжиг - происходит присоединение праймера к участку нити ДНК. И, наконец, в заключительной третьей стадии, "фермент-строитель" достраивает нити, восстанавливая ДНК. В настоящее время весь этот сложный процесс протекает в одной пробирке и состоит из повторяющихся циклов размножения амплификаций определяемой ДНК с целью получения большого количества копий, которые могут быть, затем выявлены обычными методами. То есть из одной нити ДНК мы получаем сотни тысяч или миллионы копий.
Поначалу для каждой стадии использовали отдельную водяную баню, что сильно увеличивало время получения результата. Поставить "на поток" метод помогли специальные автоматические термостаты - амплификаторы, в которых изменение температуры происходит по заданной программе. Современный амплификатор — сложный электронный прибор, не только управляющий циклами амплификации и поддерживающий необходимые температуры, но и делающий количественные замеры после каждого цикла. В её основе лежит принцип флуоресцентной детекции продуктов ПЦР непосредственно в ходе амплификации.
Детекция продуктов амплификации проводится прямо в реакционной среде через стенки или крышку закрытой пробирки. Для этого в состав реакционной смеси, наряду с праймерами и другими компонентами реакции, добавлены специальные флуоресцентные метки зонды. Флуоресцентный зонд выполнен по той же технологии, что и праймер и отличается он него тем, что на одном его конце прикреплена флуоресцентная молекула флуорофор , а на другом конце расположена специальная молекула-гаситель флуоресценции. За счёт близости гасителя, энергия поглощаемая флуорофором не вызывает флуоресцентного свечения, а целиком передаётся гасителю.
При этом, при облучении смеси ультрафиолетом, флуоресцентный отклик полностью отсутствует. Дальше всё происходит, так же, как было описано выше: В ходе ПЦР при повышении температуры происходит денатурация ДНК с распадом на две половинки. Зонд вместе с праймерами присоединяется к комплементарному участку ДНК. При этом флуорофор и гаситель освобождаются, расстояние между ними увеличивается и эффект гашения перестаёт работать.
Теперь при облучении смеси ультрафиолетом, мы получим устойчивый флуоресцентный сигнал-отклик от флуорофора. Изготавливая молекулы флуорофора с разным цветом свечения можно проводить одновременный поиск разных возбудителей в одной пробирке. Большинство используемых сегодня, для ПЦР диагностики, амплификаторов , относится к классу автоматических, высокоскоростных многофункциональных Real Time аппаратов.
По ее словам, это зависит от иммунной системы организма и «дозы» вируса, полученной человеком: — Положительный ПЦР часто бывает в течение трех недель, но может держаться и месяц. Иногда у пациента уже прошли клинические симптомы, например, вылечили пневмонию, но вирус остается. Этот человек является вирусовыделителем.
Иногда мы таких пациентов выписываем, но предупреждаем, что нужно изолироваться. Андрей Поздняков, врач-инфекционист, главный врач клинико-диагностической лаборатории ООО «Инвитро — Сибирь», напротив, замечает, что сейчас превалирующим штаммом является «дельта», кардинальное отличие которого заключается в том, что он активно размножается в организме: — Отсюда его способность «пробивать» иммунную защиту. Более активное размножение в сравнении ведет к тому, что вирусных частиц на оболочках слизистых становится на несколько порядков больше. Соответственно, они более длительное время могут улавливаться методиками обнаружения, в том числе ПЦР. То есть время выделения вируса просто стало больше. Андрей Поздняков подтверждает, что при положительном тесте, который приходит на протяжении долгого времени, есть вероятность, что это РНК уже инактивированного вируса, но ПЦР-методика не может дифференцировать РНК «неживого» вируса от РНК жизнеспособного.
Поэтому определить, заразен ли человек при получении положительного результата ПЦР, не представляется возможным. Терапевт Ирина Непомнящих объясняет, что в такой ситуации нужно изолироваться и ждать отрицательного результата: — Сейчас часто бывает, что ПЦР долгое время остается положительным. Ничего не нужно делать — просто сдавать тест и сидеть дома до отрицательного результата. Это могут быть остатки разрушенного вируса. Именно они могут давать такой результат, но пока нужно всё равно сдавать тесты.
И что это исследование значит на коронавирус надо сдать кровь или мазок? Из нашей статьи вы узнаете о том, откуда берётся клинический материал, как проводится исследование и влияют ли правила подготовки и прочие требования на его точность.
Что такое ПЦР анализ на коронавирус и что он показывает? Что такое метод полимеразной цепной реакции? Что он показывает и как выглядит? Если проводится анализ ПЦР на ковид, это означает, что при проведении особого лабораторного теста пробы биоматериала пациента подвергаются молекулярной диагностике, позволяющей выявить коронавирус. В процессе исследования будет проведена обработка проб химическим реагентом, что вызовет выделение фрагментов генетического материала возбудителя вируса SARS-CoV-2. Чтобы чужеродные нуклеиновые кислоты стали заметны для лабораторного оборудования их количество увеличивают посредством амплификации ферментом полимеразой и воздействия слабых электрических токов. После этого по наличию или отсутствию светящихся полосок оранжевого цвета будут определять контагиозность «заразность» обследуемого пациента.
Кроме того, определив этиологию заболевания врач верно подберёт терапевтичекую тактику и подходы к лечению пациента. Метод ПЦР на коронавирус: как делается забор биоматериала? Основным видом биологического материала является отделяемое зева и носа. Поэтому сдаётся на анализ мазок из ротоглотки или носоглотки, но чаще всего делают оба мазка. Процедура забора образцов слизистой, которую требует ПЦР тест на коронавирус, может быть неприятной, но важно, что она не занимает более нескольких десятков секунд, а её результат показывает заражён человек в действительности или нет. А как берут мазок? Отбор проб для анализа на коронавирус осуществляется при помощи сухого стерильного одноразового зонд-тампона с синтетическим волокном.
Лёгким движением по наружной стенке полости носа его вводят на глубину 2-3 см и слегка опускают вниз.
Вторая пара праймеров амплифицирует участок ДНК внутри продукта первой реакции. Инвертированная ПЦР [en] inverse PCR — используется в том случае, если известен лишь небольшой участок внутри нужной последовательности. Этот метод особенно полезен, когда нужно определить соседние последовательности после вставки ДНК в геном. Для осуществления инвертированной ПЦР проводят ряд разрезаний ДНК рестриктазами с последующим соединением фрагментов лигирование. В результате известные фрагменты оказываются на обоих концах неизвестного участка, после чего можно проводить ПЦР как обычно. Этим методом часто определяют, где и когда экспрессируются данные гены. Используется в некоторых методиках секвенирования и гибридизационного анализа.
ПЦР проводится как обычно, за исключением того, что один из праймеров берётся в большом избытке. ПЦР проводят при высокой температуре отжига, тем самым удаётся поддержать эффективности реакции на протяжении всех циклов [18]. В этом методе используют флуоресцентно меченые ДНК-зонды для анализа накопления продукта реакции или интеркалирующий краситель SYBR Green или его аналоги. Sybr Green I [en] обеспечивает простой и экономичный вариант для детекции и количественного определения ПЦР-продуктов в ходе ПЦР в режиме реального времени без необходимости использования специфичных флуоресцентных зондов или праймеров. Кроме главного, в спектре красителя имеются два небольших дополнительных максимума поглощения — при 290 нм и 380 нм. Первые циклы проводят при температуре выше оптимальной температуры отжига, затем каждые несколько циклов температуру отжига постепенно снижают до оптимальной.
Положительный ПЦР-тест на коронавирус после выздоровления, как правило, не опасен
Ещё одно достоинство метода — он обнаруживает даже мизерное количество вирусов и бактерий и, соответственно, распознаёт болезнь, когда видимых клинических проявлений ещё нет. Благодаря этому лечение начинается на первичной стадии, задолго до того как появляются разного рода осложнения. ПЦР более объективен, чем многие другие иммунологические способы диагностики, поскольку практически не даёт ложно-положительных ложно-отрицательные значительно более редки ввиду высокой чувствительности метода. Следует учитывать, что точность и достоверность диагностики методом ПЦР зависит от возможностей лаборатории, квалификации врачей, качества забора материала и от соблюдения правил подготовки к сдаче анализа.
Показания Анализ ПЦР на ЗППП назначают для дифференциальной диагностики при появлении следующих симптомов: боль внизу живота, в том числе во время полового акта; специфические выделения из влагалища: желтые, серые, зеленые, гнойные, пенистые, водянистые, с неприятным запахом и т. ИППП могут протекать бессимптомно, особенно у мужчин. Но даже при бессимптомном течении их нужно лечить, поскольку они провоцируют возникновение тяжелых осложнений.
Показанием к молекулярной диагностике методом ПЦР в урологии и гинекологии является: воспаление шейки матки, простаты, уретры, органов малого таза; бесплодие у мужчин и женщин; эректильные нарушения. Анализ на скрытые инфекции требуется после незащищенного полового акта с постоянным при наличии симптомов ЗППП или незнакомым партнером, на этапе подготовки к беременности , а также по окончанию лечения половых инфекций. Вирусы, как ВПЧ или генитальный герпес не поддаются лечению. Бактериальные и грибковые инфекции излечимы. Чтобы обнаружить скрытое присутствие вируса герпеса в крови, необходимо сдать анализ на антитела IgG. Противопоказания Соскоб ПЦР не берут во время месячных.
Альтернативой может стать анализ крови. Также исследование не проводят во время местной или общей антибактериальной терапии.
ПЦР-тест необходимо сдавать для установления факта заболевания коронавирусом. Этот вариант диагностики позволяет обнаружить вирус на его начальной стадии, даже если у пациента еще нет признаков и симптомов болезни. Антитела, в свою очередь, это ответная реакция организма на коронавирус. Результат теста на антитела IgG и IgM позволяет понять, на какой именно фазе заболевания находится пациент, а также помогает определить, была ли перенесена инфекция в прошлом. Если Вы хотите максимально точно определить болеете ли Вы, на какой стадии заболевания находитесь или же понять, было ли заболевание в прошлом, то лучшим вариантом будет сдача не только ПЦР-теста, но и теста на антитела. В совокупности, результаты этих тестов дадут самый четкий и информативный результат.
Для того, чтобы понять, что означают те или иные результаты, необходимо рассмотреть каждый случай по отдельности: ПЦР — отрицательный, IgG — положительный, IgM — отрицательный.
Вот этим чудо-методом и стал метод полимеразной цепной реакции ПЦР. Эта реакция носит название репликации ДНК.
Так это звучит сухим академическим языком. Но мы задались целью, объяснить Вам всё, буквально, "на пальцах", а потому продолжим свой рассказ о том, как всё происходит. На первом этапе реакции надо разъединить двойную нить ДНК.
Этот процесс называется денатурацией и проходит при температуре 93 - 95 градусов Цельсия. Уже через 30 - 40 секунд связи нуклеотидов разрываются и вместо двойной цепи получаются две одиночные. Надо заметить, что если после этого, снова, просто понизить температуру, то разделившиеся половинки достаточно быстро находят друг друга и всё возвращается, практически, к исходному состоянию.
Следовательно, нам надо не дать соединиться половинкам интересующей нас ДНК. Как этому помешать? Тогда, место на половинке-основании окажется занято, при попытке присоединения, свойство комплементарности окажется нарушено, и вторая половинка не сможет прицепиться на своё "законное" место.
Это "что-то" названное праймером, синтезируется в научной или промышленной лаборатории и представляет собой цепочку синтетических нуклеотидов олигонуклеотидов , расположенных в таком же порядке, как и у того вируса бактерии и так далее , на который делается анализ. Например, если делают анализ на хламидии, то праймер соответствует специфическому участку гена, кодирующего главный белок наружной мембраны МОМР Chlamydia trachomatis. Итак, вторая стадия - присоединение праймеров к ДНК также называется отжигом длится от 20 до 60 секунд.
Температура отжига равна 50 - 65 градусам для каждого вида возбудителей, то есть для каждого праймера, она своя. На этом этапе мы уже разделили ДНК на две половинки и не даём им соединиться. Теперь самое время достроить каждую половинку до полноценной ДНК.
Но температура, при которой это должно произойти, очень высока, по меркам молекулярной биологии — более 70 градусов выше температуры отжига. Проблема была решена благодаря открытию уникального фермента taq-ДНК-полимеразы, содержащегося у бактерий, обитающих в гейзерах. Особенность этого фермента заключается в его исключительной термостойкости период полужизни при 95 градусах составляет 40 минут и высокой рабочей температуре — оптимум работы 72градуса.
В клетках, фермент ДНК-полимеразы отвечает за копирование и "ремонт" ДНК и способен удлинять короткие нуклеотидные цепочки праймеров, последовательно присоединяя к одному из концов праймера дополнительные нуклеотиды, таким образом, достраивая цепь до конца. Так ДНК копирует саму себя. Третий этап - достраивание цепей ДНК.
Комплементарное достраивание цепей ДНК происходит от конца к концу цепи в противоположных направлениях, начиная с участков присоединения праймеров.
ПЦР положительный – что это значит?
Полимеразная цепная реакция (ПЦР) — высокоточный метод диагностики заболеваний, основанный на копировании ДНК или РНК патогена в пробе. Содержание. Что такое ПЦР или экспресс-тест? ПЦР (полимеразная цепная реакция) представляет собой метод выявления присутствующего в организме вируса – у человека для этого берутся мазки из носа, ротоглотки. Положительный ПЦР означает только то, что Вы заразны для окружающих и выделяете вирус. Суть полимеразной реакции. Полимеразная цепная реакция (ПЦР, PCR) — это точный метод лабораторной диагностики, который используют для выявления возбудителей инфекционных заболеваний.
ПЦР диагностика: что это такое
При заборе материала требуются условия, исключающие контаминацию загрязнение материала и, соответственно, ставящие под сомнение объективность анализа. Правильная подготовка к сдаче материала не представляет особых сложностей. Существуют следующие рекомендации врачей для пациентов: 1 не жить половой жизнью за сутки до сдачи материала; 2 кровь для исследования сдается утром натощак не есть, не пить ; 3 при сдаче мочи собирается первая утренняя порция в чистый стерильный контейнер. Сроки готовности ПЦР-анализа Окончательный результат готов через 1,5-2х суток после сдачи материала. В некоторых случаях результат готов в первый же день. Расшифровка результатов ПЦР Отрицательный результат ПЦР указывает на то, что в исследуемом материале на момент его сдачи не обнаружено никаких следов инфекционных агентов. Большинство случаев показывает отсутствие инфекции, которую пытались найти в исследуемой пробе. Положительный результат ПЦР указывает на выявление следов инфекции в исследуемой биологической пробе. С большой точностью положительный результат указывает на наличие инфекции в данный момент времени. Существуют ситуации, когда ПЦР оказывается положительной, а об активной инфекции говорить нельзя — это так называемое «здоровое носительство» без клинических симптомов болезни, которое не требует лечения, но требует динамического наблюдения у врача. Наблюдается чаще при ряде вирусных инфекций ВПЧ, ЦМВИ, ВЭБ-инфекция, герпетическая инфекция и другие в таких материалах как слюна, соскоб цервикального канала, уретры, то есть из местного очага.
Однако нельзя забывать, что передача инфекции от носителей здоровым людям возможна, как и возможен переход в хроническую форму болезни с активацией процесса. Если же ПЦР положительна в крови, то это уже не носительство и требует специфического лечения.
Но он уже спустя неделю получил отрицательный тест, — рассказывает пациентка Людмила. Приходит врач каждую неделю, и уже четыре раза положительный тест. Сначала было весело и задорно, так как я работаю онлайн и не беру больничный.
Но спустя месяц откровенно заявляю: это больше не смешно и невозможно» По ее словам, симптомы давно прошли — еще в августе, лечение закончилось тогда же. Людмила говорит, что не смогла получить ответа от врача ни на вопрос о том, почему так происходит, ни на вопрос, как долго она будет считаться ковид-положительной. Такая же ситуация у другого пациента — Ивана. Симптомы болезни прошли в течение недели, после этого он сдал повторный тест, но тест показал, что он всё еще заразен.
Его берут из носовой пазухи — места наибольшей концентрации вируса. В случае ПЦР биоматериал берут дважды, через нос и через рот, смешивают с физраствором и отправляют в лабораторию. Все исследование занимает около трех часов, рассказывает технолог подразделения молекулярно-генетических исследований лаборатории Маргарита Абрамова.
В лаборатории, кроме регулярной смены перчаток, важно аккуратно открывать пробирки — так, чтобы микроаэрозоль из одной пробирки не попал в другую. Самое сложное — контаминация продуктами амплификации или ампликонами размножение фрагментов нуклеиновых кислот в исследовании ПЦР — Прим. По сути, это аварийная ситуация, которая требует проведения срочных мер в лаборатории. В этом исследовании ее риск минимален, поскольку пробирка после амплификации не открывается, и ампликоны во внешнюю среду не попадают. Возможные причины ложноотрицательных результатов По словам Натальи Гасиловой, здесь основная причина кроется в чувствительности тест-системы, которая применяется в конкретной лаборатории. Она позволяет выявлять вирус как у бессимптомных и контактных в начале развития инфекции, так и в конце заболевания — уже на этапе выздоровления. Но если в образце количество вируса будет меньше порога чувствительности, то лаборатория выдаст ложноотрицательный результат, — поясняет эксперт. Еще на результат влияет корректность взятия биоматериала со слизистой оболочки носо- и ротоглотки: к примеру, мазок взяли только из зева, а надо еще и из носа.